Колориметрический метод Шомадьи — Нельсона основан на реакции восстанавливающих сахаров с реактивом Шомадьи — Нельсона, в результате которой образуется окрашенное соединение «молибденова синь» общего состава MonO3n-x голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию восстанавливающих углеводов, которые определяют по величинам оптических плотностей при 508 нм, по калибровочной кривой, составленной с применением модельных растворов. Метод неспецифичен, трудоемок.

Реактивы и материалы: а) Реактив Шомадьи.

a 24 г карбоната натрия и 12 г тартрата калия — натрия (калий натрий виннокислый средний) помещают в коническую колбу вместимостью 500 см3 и добавляют 250 см3 дистиллированной воды. Затем приливают 40 см310 % раствора сульфата меди, перемешивают и добавляют 16 г гидрокарбоната натрия.

b.18 г Na2SO4 растворяют в 500 см3 горячей дистиллированной воды. Раствор кипятят в течение 40 минут для удаления СО2, затем охлаждают.

Cмешивают (a+b) в мерной колбе на 1 дм3, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. В течение первых двух-трех суток хранения реактива Шомадьи оседает небольшое количество меди с примесями. Этот осадок отфильтровывают, готовый раствор хранят в темной склянке.

б) Реактив Нельсона.

a 25 г модибдата аммония помещают в мерную колбу на 500 см3 и растворяют в 150 см3 Н2О. Раствор перемешивают, к нему осторожно небольшими порциями добавляют 21 см3 концентрированной H2SO4 (х. ч.) при непрерывном перемешивании.

b 3 г гептагидрата гидроортоарсената натрия (Na2HAsO4 • 7Н2О) растворяют отдельно в химическом стаканчике в 50 см3 Н2О

(a+b). Получается прозрачный раствор светло-желтого цвета, его доводят до метки водой и выдерживают в термостате при 37 "С в течение 2 суток. После выдержки раствор готов к употреблению.

Ход работы.

1.Проведение анализа: К 1 см3 испытуемого раствора добавляют 1 см3 реактива Шомадьи, перемешивают и выдерживают на кипящей водяной бане в течение 15 минут:

СuSO4 + 2NaOH [гидролитический] ¾¾® Cu(OH)2 + Na2SO4

Затем к охлажденной смеси добавляют 1 см3 реактива Нельсона и доводят объем до 10 см3 дистиллированной водой:

Na2HAsO4 + 15H2SO4 + 12(NH4)2MoO4 [в реактиве Нельсона]¾¾® (NH4)3H4[As(Mo2O7)6] + 21(NH4)2SO4 + Na2SO4 + 10H2O

2(NH4)3H4[As(Mo2O7)6] + Cu2O ¾¾® 4Mo6O17 + 2CuO +(NH4)2SO4 + 2(NH4)2HAsO4 + 3H2O

Оптическую плотность полученного раствора измеряют при 590 нм с использованием кюветы с шириной грани 5 мм.

2.Построение калибровочной кривой. Калибровочную кривую строят после проведения колориметрической реакции модельных растворов глюкозы с концентрацией от 0,02 до 0,14 мг/см3. Изучаемая зависимость выражается прямой линией, выходящей из начала координат.