2

Н-меченые аминокислоты.

Общий принцип изучения уровней изотопного включения в молекулы аминокислот при данном способе введения метки были продемонстрированы на примере анализа сложных мультикомпонентных смесей, полученных после гидролиза суммарных белков биомассы. До десяти аминокислот могут быть идентифицированы в гидролизате белка по пикам молекулярных ионов метиловых эфиров их N-Dns-производных аминокислот, которые соответствовали смесям изотопнозамещённых форм. Уровни изотопного включения дейтерия в молекулы аминокислот в 49%-ной 2Н2O варьируют от 25.6% для тирозина до 45.0% для аланина (рис. 14 и табл. 4). В молекулах глицина, валина, фенилаланина, серина, лизина, аспарагиновой и глутаминовой кислот они находятся в пределах 35 - 40%. Уровни изотопного включения остальных аминокислот сопоставимы. Данный результат подтверждается разделением белковых гидролизатов методом ОФ ВЭЖХ в виде метиловых эфиров N-Dns, Bzl-производных аминокислот и ионнообменной хроматографии, где детектируется 15 аминокислот (рис. 15).

Таблица 4.

Степени включения D и 13С в аминокислотные остатки общих белков биомассы В. melhyiicum* и М. flagellatum**.